Développement de techniques diagnostiques fondées sur l’identification de marqueurs virologiques et cellulaires, spécifiques du profil évolutif des PVI ou des pathologies qui leur sont associées (lymphomes, hépatocarcinome) ;

Evaluation de la sensibilité des PVI à des antiviraux spécifiques et à des modulateurs du fonctionnement cellulaire (par exemple des agonistes ou antagonistes de HMGB1) utilisés seuls ou en association ;

Détection et quantification de la résistance acquise aux traitements dirigés contre les PVI.

L’équipe est spécifiquement intéressée par la pathogenèse et le traitement des infections virales persistantes (PVI). Elle s’appuie sur des compétences complémentaires et convergentes en virologie médicale, développement de modèles animaux, biologie cellulaire, imagerie cellulaire et biologie moléculaire, ce qui permet d’explorer les PVI de façon totalement intégrée. Les investigations se concentrent sur trois virus à ADN de grande importance médicale, le virus de l’hépatite B (HBV) et deux herpèsvirus, le virus Epstein-Barr (EBV) et l’herpèsvirus humain 6 (HHV-6). Le programme de recherche est construit selon deux axes principaux et interconnectés : comprendre la physiopathologie et développer de nouveaux traitements. Il est décliné en plusieurs questions spécifiques et est appelé à bénéficier de collaborations étroites avec d’autres équipes du CIMI, notamment en ce qui concerne l’immunité innée et l’immunité spécifique contre les trois virus cibles. Le rôle de l’alarmine circulante HMGB1 dans la genèse et le développement des lymphomes associés à l’EBV est étudiée à travers l’expression de ses récepteurs, les récepteurs Toll-like (TLR) -2, -4 et -9 et RAGE, sur les lymphocytes B, notamment chez les sujets VIH-positifs. En parallèle, l’effet de HMGB1 sur l’infection et la transformation cellulaire précoce induites par l’EBV sera évalué sur des lymphocytes B primaires ou dérivés de lignées immortalisées. Cela pourrait permettre d’identifier les gènes répondant à la stimulation de HMGB1 et impliqués dans la cancérogenèse liée à l’EBV. L’impact de l’expression du génome viral sur l’expression des TLR et de RAGE sera mesuré à la fois ex vivo et chez les malades atteints de lymphomes liés à l’EBV. L’objectif est de confirmer ou d’infirmer l’existence d’une activité de promotion auto-amplifiée de l’EBV et HMGB1 dans le développement de ces tumeurs, ce qui révèlerait des interactions originales entre l’immunité innée et la cancérogenèse induite par l’EBV. Le rôle de l’HBV dans la cirrhose et le cancer hépatocellulaire est analysé sous l’angle de l’activité spécifique des protéines HBx, HBSP et HBs. La modulation de la production de l’antigène HBs durant les différentes phases de l’infection chronique à HBV est étudiées dans les cohortes de sujets infectés et, in vitro, en cultures d’hépatocytes primaires. Les anomalies de régulation des processus inflammatoires induits expérimentalement par le LPS ou des carcinogènes chimiques sont étudiés chez des souris transgéniques exprimant HBx ou HBSP. En parallèle, sera étudié le rôle de la réponse innée dans l’apoptose ou la lyse des hépatocytes, en particulier l’expression, la sécrétion et l’activité fonctionnelle de HMGB1 au cours de l’atteinte hépatique. Les épissages alternatifs de l’ARN prégénomique du HBV, qui sont à l’origine de la synthèse d’HBSP et sont soupçonnés de moduler la fibrogenèse hépatique seront quant à eux étudiés avec des souris transgéniques exprimant le génome viral entier et exposées à des carcinogènes chimiques. Dans le but de créer un modèle murin mimant quasi totalement l’infection à HBV in vivo, des souris humanisées sont en cours de développement à partir de greffes conjointes de cellules immunes et d’hépatocytes de façon à analyser précisément les interactions entre le système immunitaire et le foie, en particulier durant les étapes précoces de l’infection à HBV. L’intégration chromosomique de l’ADN du HHV-6 (ciHHV-6) est un phénomène de latence unique chez les herpèsvirus humains. Les possibles conséquences physiopathologiques de ciHHV-6 sont en cours d’investigation au cours de la grossesse et des transplantations d’organes. La caractérisation moléculaire du processus d’intégration sera effectuée dans les échantillons cliniques et dans des lignées de cellules transformées. Le rôle des produits du gène U94, impliqué de façon importante dans la latence virale, sera tout spécialement analysé. La capacité de réactivation et d’induction d’une infection productive à partir de ciHHV-6 sous la stimulation du microenvironnement des cellules infectées sera aussi étudiée et confrontée aux observations d’induction médicamenteuse chez les malades présentant un syndrome DRESS. La sensibilité de l’EBV et du HHV-6 aux analogues nucléosidiques/nucléotidiques est étudiée grâce au suivi biologique des patients traités et des tests de sensibilité in vitro. La variabilité de la réponse au traitement est corrélée à des mutations des gènes viraux cibles des molécules antivirales, à partir de l’analyse de mutants viraux sélectionnés in vitro et d’isolats obtenus de malades en situation d’échec thérapeutique. Des thérapeutiques innovantes seront aussi testées, associant des antiviraux spécifiques et des molécules modulatrices du fonctionnement cellulaire, telles les inhibiteurs d’histone déacétylase, l’hydroxyurée, et les anthracyclines qui, par ailleurs, peuvent aussi moduler les phénomènes de réactivation virale.

Mots clés

Virus, infection chronique, immunité innée, chimiothérapie antivirale, lymphome, hépatocarcinome, HMGB1, virus de l’hépatite B, herpèsvirus humain 6, virus Epstein-Barr.

Expertise technique de l’équipe

Diagnostic moléculaire et sérologique des infections virales à herpèsvirus et HBV

Techniques de biologie moléculaire (PCR, RT-PCR, séquençage, clonage, expression contrôlée, analyse informatique) appliquée à l’étude des génomes et transcrits viraux

Tests phénotypiques et génétiques de sensibilité et de résistance aux antiviraux

Modèles murins transgéniques d’infection à HBV

Publications principales dans la thématique

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